Спосіб приготування концентрату тромбоцитів
Кров відбирають у корів на 40-й день після отелення, тому що в цей період в системі кровообігу кількість тромбоцитів вища порівняно з іншими періодами. Корови-донори повинні бути здоровими, без інфекційних захворювань і медикаментозного лікування протягом попередніх двох місяців. Тромбоцити виділяють методом подвійного центрифугування за наступною процедурою.
Після хірургічної обробки місця пункції навколо молочної або яремної вени відбирають 450 мл крові у спеціальні контейнери (Terumo) з антикоагулянтом (ЦФДА-1). Контейнери з кров’ю транспортують до лабораторії при температурі +4 °C протягом не більше 2 годин та одразу здійснюють виділення тромбоцитів.
Усі операції сепарування проводять в асептичних умовах. Для приготування тромбоцитів використовують пробірки Falcon по 50 мл. Вміст пробірок центрифугують протягом 30 хв. при максимальній центробіжній силі 100xg. В результаті кров розділяється на три складові: еритроцити (нижній шар), лейкоцитарну плівку (середній шар) та збагачену тромбоцитами плазму (верхній шар).
Потому відділяють шар плазми в нові пробірки (50 мл) та здійснюють повторне центрифугування при 1500xg протягом 10 хв. В результаті отримують осад тромбоцитів та бідну на тромбоцити плазму. Далі 2/3 верхнього шару плазми забирають шляхом аспірації. Осад змішують із залишком плазми. Концентрацію тромбоцитів доводять до стандартного рівня — 1×109 тромбоцитів/мл.
Отриманий концентрат фасують у шприци на дози по 10 мл. Для активації тромбоцитарних факторів здійснюють три цикли заморожування при -80 °C та розморожування до 37 °C. Шприци з дозами тромбоцитів зберігають замороженими при -20 °C до використання.
Конвертаційна таблиця параметрів центрифугування, обертів на хвилину (об./хв.) до центробіжної сили (xg)
Швидкість, об./хв. |
Радіус ротора (від центру ротора до зразка), см |
|||||||||||
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
13 |
14 |
15 |
|
1000 |
45 |
56 |
67 |
78 |
89 |
101 |
112 |
123 |
134 |
145 |
157 |
168xg |
1500 |
101 |
126 |
151 |
176 |
201 |
226 |
252 |
277 |
302 |
327 |
352 |
377xg |
2000 |
179 |
224 |
268 |
313 |
358 |
402 |
447 |
492 |
537 |
581 |
626 |
671xg |
2500 |
280 |
349 |
419 |
489 |
559 |
629 |
699 |
769 |
839 |
908 |
978 |
1048xg |
3000 |
402 |
503 |
604 |
704 |
805 |
906 |
1006 |
1107 |
1207 |
1308 |
1409 |
1509xg |
3500 |
548 |
685 |
822 |
959 |
1096 |
1233 |
1370 |
1507 |
1643 |
1780 |
1917 |
2054xg |
4000 |
716 |
894 |
1073 |
1252 |
1431 |
1610 |
1789 |
1968 |
2147 |
2325 |
2504 |
2683xg |
4500 |
906 |
1132 |
1358 |
1585 |
1811 |
2038 |
2264 |
2490 |
2717 |
2943 |
3170 |
3396xg |
5000 |
1118 |
1398 |
1677 |
1957 |
2236 |
2516 |
2795 |
3075 |
3354 |
3634 |
3913 |
4193xg |