Способ приготовления концентрата тромбоцитов
Кровь отбирают у коров на 40-й день после отела, так как в этот период в системе кровообращения количество тромбоцитов выше по сравнению с другими периодами. Коровы-доноры должны быть здоровыми, без инфекционных заболеваний и медикаментозного лечения в течение предыдущих двух месяцев. Тромбоциты выделяют методом двойного центрифугирования по следующей процедуре.
После хирургической обработки места пункции вокруг молочной или яремной вены отбирают 450 мл крови в специальные контейнеры (Terumo) с антикоагулянтом (ЦФДА-1). Контейнеры с кровью транспортируют в лабораторию при температуре +4 °C в течение не более 2 часов и сразу осуществляют выделение тромбоцитов.
Все операции сепарирования проводят в асептических условиях. Для приготовления тромбоцитов используют пробирки Falcon по 50 мл. Содержимое пробирок центрифугируют в течение 30 мин. при максимальной центробежной силе 100xg. В результате кровь разделяется на три составляющие: эритроциты (нижний слой), лейкоцитарную пленку (средний слой) и обогащенную тромбоцитами плазму (верхний слой).
После отделяют слой плазмы в новые пробирки (50 мл) и осуществляют повторное центрифугирование при 1500xg в течение 10 мин. В результате получают осадок тромбоцитов и бедную на тромбоциты плазму. Далее 2/3 верхнего слоя плазмы забирают путем аспирации. Осадок смешивают с остатком плазмы. Концентрацию тромбоцитов доводят до стандартного уровня — 1×109 тромбоцитов/мл.
Полученный концентрат фасуют в шприцы на дозы по 10 мл. Для активации тромбоцитарных факторов осуществляют три цикла замораживания при -80 °C и размораживание до 37 °C. Шприцы с дозами тромбоцитов сохраняют замороженными при -20 °C до использования.
Конвертационная таблица параметров центрифугирования, оборотов в минуту (об./мин.) до центробежной силы (xg)
Скорость, об./мин. |
Радиус ротора (от центра ротора до образца), см |
|||||||||||
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
13 |
14 |
15 |
|
1000 |
45 |
56 |
67 |
78 |
89 |
101 |
112 |
123 |
134 |
145 |
157 |
168xg |
1500 |
101 |
126 |
151 |
176 |
201 |
226 |
252 |
277 |
302 |
327 |
352 |
377xg |
2000 |
179 |
224 |
268 |
313 |
358 |
402 |
447 |
492 |
537 |
581 |
626 |
671xg |
2500 |
280 |
349 |
419 |
489 |
559 |
629 |
699 |
769 |
839 |
908 |
978 |
1048xg |
3000 |
402 |
503 |
604 |
704 |
805 |
906 |
1006 |
1107 |
1207 |
1308 |
1409 |
1509xg |
3500 |
548 |
685 |
822 |
959 |
1096 |
1233 |
1370 |
1507 |
1643 |
1780 |
1917 |
2054xg |
4000 |
716 |
894 |
1073 |
1252 |
1431 |
1610 |
1789 |
1968 |
2147 |
2325 |
2504 |
2683xg |
4500 |
906 |
1132 |
1358 |
1585 |
1811 |
2038 |
2264 |
2490 |
2717 |
2943 |
3170 |
3396xg |
5000 |
1118 |
1398 |
1677 |
1957 |
2236 |
2516 |
2795 |
3075 |
3354 |
3634 |
3913 |
4193xg |